стр. 1

стр. 2

стр. 3

стр. 4

стр. 5

стр. 6

стр. 7

стр. 8

стр. 9

стр. 10

стр. 11

стр. 12

стр. 13

стр. 14

стр. 15

стр. 16

стр. 17

стр. 18

стр. 19

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫМ

СТАНДАРТ

РОССИЙСКОЙ

ФЕДЕРАЦИИ

ИЗДЕЛИЯ МЕДИЦИНСКИЕ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ

IN VITRO

Информация, предоставляемая изготовителем с диагностическими реагентами in vitro, применяемыми для окрашивания в биологии

In vitro diagnostic medical devices - Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for staining in biology (IDT)

Издание официальное

Стандартинформ

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Лабораторией проблем клинико-лабораторной диагностики НИИ общественного здоровья и управления здравоохранением Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова» Минздрава РФ на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 380 «Клинические лабораторные исследования и медицинские изделия для диагностики in vitro»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 25 октября 2013 г. № 1201-ст.

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 19001:2002 «Изделия медицинские для диагностики in vitro. Информация, предоставляемая изготовителем с диагностическими реагентами in vitro для окрашивания в биологии» (ISO 19001:2002 «/л vitro diagnostic medical devices - Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for staining in biology»).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5 (подраздел 3.5).

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)

© Стандартинформ, 2014

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

А.4.2.3.3 Методика окрашивания

А.4.2.3.3.1 Депарафинируют и регидратируют срезы ткани; проводят изменение антигена (см. вышеприведенную методику окрашивания)

А.4.2.3.3.2 Инкубируют с перекисью водорода массовой долей 3 % в дистиллированной воде в течение 5

А.4.2.3.3.3 Промывают дистиллированной водой и помещают в TBS на 5 мин.

А.4.2.3.3.4 Инкубируют с моноклональным мышиным античеловеческим рецептором эстрогенов, разведенным оптимально в TBS (см.А.4.2.3), в течение 20 - 30 мин.

А.4.2.3.3.5 Промывают TBS и помещают в баню TBS на 5 мин.

А.4.2.3.3.6 Инкубируют с рабочим раствором биотинилированного козьего антитела к мышиным/кроличьим иммуноглобулинам в течение 20 - 30 мин.

А.4.2.3.3.7 Промывают TBS и помещают в баню TBS на 5 мин.

А.4.2.3.3.8 Инкубируют с рабочим раствором комплекса СтрептАвидин-биотин/пероксидаза хрена в течение 20 - 30 мин.

А.4.2.3.3.9 Промывают TBS и помещают в баню TBS на 5 мин.

А.4.2.3.3.10 Инкубируют с раствором DAB в течение 5-15 мин (при обращении с DAB использовать перчатки).

А.4.2.3.3.11 Промывают дистиллированной водой.

А.4.2.3.3.12 Проводят контрастное окрашивание раствором гематоксилина в течение 30 с.

А.4.2.3.3.13 Промывают водой из-под крана в течение 5 мин.

А.4.2.3.3.14 Промывают дистиллированной водой в течение 5 мин.

А.4.2.3.3.15 Дегидратируют этанолом с объемной долей 50 % в течение 3 мин, затем 3 мин с объемной долей 70 % и, наконец, 3 мин с объемной долей 99 %.

А.4.2.3.3.16 Промывают в двух сменах ксилена, по 5 мин в каждой. А.4.2.3.3.17 Извлекают в синтетическую гидрофобную смолу.

А.4.2.3.4 Предлагаемые разведения

Оптимальное окрашивание может быть получено путем разведения антитела в TBS с pH = 7,6, смешанным по объему от (1 + 50) до (1 + 75) мкл при исследовании на фиксированных формалином парафинированных срезах раковой опухоли грудной железы человека. Антитело может быть разведено TBS, смешанным по объемам от (1 + 50) до (1 + 100) мкл, для использования в технологии АРААР и авидин-биотиновых методах, при исследовании фиксированных ацетоном срезов замороженной ткани раковой опухоли грудной железы.

А.4.2.3.5 Ожидаемые результаты

Антитело интенсивно метит ядра клеток, которые, как известно, содержат большое число рецепторов эстрогенов, например, эпителиальные и миометриальные клетки матки и нормальные и гиперплазированные эпителиальные клетки молочных желез. Окрашивание преимущественно локализовано в ядрах без окрашивания цитоплазмы. Однако, на срезах криостата, содержащих небольшие или неопределимые количества рецепторов эстрогенов (например, эпителий кишечника, клетки сердечной мышцы, клетки мозга и соединительной ткани), отмечают отрицательные результаты с антителом. Антитело метит эпителиальные клетки карциномы грудной железы, которые экспрессируют рецептор эстрогенов.

Окрашивание ткани зависит от обращения и обработки ткани до окрашивания. Неправильная фиксация, замораживание, оттаивание, промывание, высушивание, нагревание, срезание или загрязнение другими тканями или жидкостями может вызвать артефакты или ложноотрицательные результаты.

А.5 Демонстрация 7-клеток с помощью проточной цитометрии

ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ - Реагент содержит азид натрия (15 ммоль/л). NaN 3 может реагировать со свинцом или медью, образуя взрывоопасные азиды металлов. При удалении смыть большим объемом воды.

А.5.1 Моноклональные мышиные античеловеческие Г-кпетки

Следующая информация относится к моноклональным мышиным античеловеческим 7-кпеткам:

a) идентичность продукта: моноклональные мышиные античеловеческие 7-кпетки, CD3;

b) клон: UCHT;

c) иммуноген: человеческие детские тимоциты и лимфоциты от пациента с болезнью Сезари (Sezary);

d) источник антител: очищенные моноклональные мышиные антитела;

e) специфичность: антитело реагирует с T-клетками в тимусе, костном мозге, периферической лимфоидной ткани и крови. Большинство Т-клеток опухолей также экспрессируют антиген CD3, но он отсутствует в не Т-клеточных лимфоидных опухолях. Согласуется с моделью синтеза антигена в нормальных тимоцитах, наиболее ранним местом определения в опухолевых клетках является цитоплазма клетки;

f) состав:

0,05 моль/л Tris/HCI буфер, 15 ммоль/л NaN 3 , pH = 7,2, альбумин бычьей сыворотки, массовая доля 1

Изотип lg: IgGI;

Очистка lg: белок А колонка сефарозы;

Чистота: массовая доля приблизительно 95 %;

Молекула конъюгата: флюоресцеин изотиоцианат изомер 1 (FITC);

- (ЯР)-отношение: £ 495 нм/£ 278 нм =1,0 ± 0,1 соответственно молярному отношению FITC/белок приблизительно 5;

д) обращение и хранение: стабильны в течение трех лет после выделения при температуре от 2 °С до 8

А.5.2 Предназначенное применение

А.5.2.1 Общие положения

Антитело предназначено для применения в проточной цитометрии. Антитело может быть использовано для качественного и количественного обнаружения Т-клеток.

А.5.2.2 Тип (типы) материала

Антитело может быть применено на суспензиях свежих и фиксированных клеток, фиксированных ацетоном срезах криостата, на клеточных мазках.

А.5.2.3 Методика исследования реактивности антитела для проточной цитометрии

Детали методики, использованной изготовителем, следующие:

а) Собирают венозную кровь в пробирку, содержащую антикоагулянт.

b) Изолируют одноядерные клетки путем центрифугирования на разделительной среде; в ином случае лизируют эритроциты после стадии инкубации, указанной в перечислении d).

c) Промывают одноядерные клетки дважды с RPMI 1640 или забуференным фосфатом солевым раствором (PBS) (0,1 моль/л фосфата, 0,15 моль/л NaCI, pH = 7,4).

d) К 10 мкл конъюгированным FITC моноклональным мышиным анти-человеческим Т-клеткам, реагент CD3, добавляют суспензию клеток, содержащую 1 - 10 е клеток (обычно около 100 мл), и перемешивают. Инкубируют в темноте при температуре 4 °С в течение 30 мин [для двойного окрашивания в то же время должно быть добавлено антитело, конъюгированное R-фикоэритрином (RPE)].

е) Промывают дважды PBS + 2 % альбумин бычьей сыворотки; ресуспендируют клетки в соответствующей жидкости для анализа на проточном цитометре.

f) В качестве негативного контроля используют иное моноклональное антитело, конъюгированное FITC (флюоресцеин изотиоцианатом)

д) Фиксируют осажденные клетки, перемешивая с 0,3 мл параформальдегида массовой долей 1 % в PBS. При хранении в темноте при температуре 4 °С фиксированные клетки могут содержаться до двух недель.

h) Проводят анализ на проточном цитометре.

А.5.2.4 Предлагаемое разведение

Антитело должно использоваться для проточной цитометрии в концентрированной форме (10 мкл/гест). Для применении на срезах криостата и мазках клеток антитело должно быть смешано с подходящим разбавителем в соотношении объемов (1 + 50) мкл.

А.5.2.5 Ожидаемые результаты

Антитело обнаруживает CD3 молекулу на поверхности Т-кпеток. При оценке окрашивания срезов криостатов и мазков клеток продукт реакции должен быть локализован на мембране плазмы.

Окрашивание ткани зависит от обращения и обработки ткани до окрашивания. Неправильная фиксация, замораживание, оттаивание, промывание, высушивание, нагревание, получение срезов или загрязнение другими тканями или жидкостями может вызвать образование артефактов или ложноотрицательные результаты.

Приложение ДА (справочное)

Сведения о соответствии ссылочных международных и европейских региональных стандартов национальным стандартам Российской Федерации

Таблица ДА.1

Обозначение ссылочного международного стандарта соответствия Обозначение и наименование соответствующего национального стандарта * Соответствующий национальный стандарт отсутствует. До его утверждения рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта. Перевод данного международного стандарта находится в Федеральном информационном центре технических регламентов и стандартов.

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ИЗДЕЛИЯ МЕДИЦИНСКИЕ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ IN VITRO Информация, предоставляемая изготовителем с диагностическими реагентами in vitro, применяемыми для окрашивания в биологии

In vitro diagnostic medical devices. Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for staining in biology

Дата введения - 2014-08-01

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает требования к информации, предоставляемой изготовителями с реагентами, применяемыми для окрашивания в биологии. Требования относятся к изготовителям, поставщикам и продавцам красителей, красок, хромогенных реагентов и других реагентов, применяемых для окрашивания в биологии. Требования к информации, предоставляемой изготовителями, устанавливаемые настоящим стандартом, являются необходимым условием получения сравнимых и воспроизводимых результатов во всех сферах окрашивания в биологии.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие международные и европейские региональные стандарты:

ИСО 31-8, Величины и единицы. Часть 8. Физическая химия и молекулярная физика (ISO 31-8, Quantities and units - Part 8: Physical chemistry and molecular physics)

EH 375:2001 Информация, предоставляемая изготовителем с реактивами для диагностики in vitro для профессионального применения (EN 375:2001, Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for professional use)

EH 376:2001 Информация, предоставляемая изготовителем с реактивами для диагностики in vitro для самотестирования (EN 376:2001, Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for self-testing)

Примечание- При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими им определениями:

3.1 информация, предоставляемая изготовителем (information supplied by the manufacturer): Вся печатная, письменная, графическая или иная информация, прилагаемая или сопровождающая реагент для диагностики in vitro.

3.2 маркировка (label): Любая печатная, письменная или графическая информация, нанесенная на упаковку.

Издание официальное

3.3 реагент диагностики in vitro (in vitro diagnostic reagent): Реагент, используемый самостоятельно или в комбинации с другими медицинскими изделиями для диагностики in vitro, предназначенный изготовителем для исследований in vitro веществ человеческого, животного или растительного происхождения с целью получения информации, относящейся к обнаружению, диагностике, мониторингу или лечению физиологических состояний, состояний здоровья или болезни иди врожденной аномалии.

3.4 окрашивание (staining): Придание цвета материалу с помощью реакции с красителем или хромогенным реагентом.

3.5 красящее вещество (dye): Окрашенное органическое соединение, которое, будучи растворенным в подходящем растворителе, способно придать цвет материалу.

Примечание - Физической природой цвета является избирательная абсорбция (и/или эмиссия) в видимой области электромагнитного спектра между 400 и 800 нм. Красящие вещества являются молекулами с большими системами делокализованных электронов (связанных тт-элекгронных систем). Характеристики абсорбции света красящих веществ представлены спектром абсорбции в форме диаграммы, на которой сопоставлены абсорбция света и длина волны. Спектр и длина волны при максимальной абсорбции зависят от химической структуры красящего вещества, растворителя и от условий спектрального измерения.

3.6 краситель, краска (stain): Раствор одного или нескольких красящих веществ в определенных концентрациях в определенном растворителе, используемый для окрашивания.

Примечание - Краска может быть приготовлены прямым растворением красящего вещества в растворителе или разведения готового основного раствора подходящими агентами.

3.6.1 основной раствор красителя (stock solution of stain): Стабильный определенный раствор одного или нескольких красящих веществ в более высокой концентрации, чем используемая при окраске.

Примечание - Стабильность означает постоянство свойств красящего вещества даже в присутствии других красящих веществ.

3.7 хромогенный реагент (chromogenic reagent): Реагент, который реагирует с химическими группами, присутствующими или вызванными в клетках и тканях, с образованием окрашенного соединения in situ.

Пример - Типичные хромогенные реагенты:

a) соль диазония;

b) реагент Шиффа.

3.8 флюорохром (fluorochrome): Реагент, который испускает видимый свет при облучении возбуждающим светом более короткой длины волны.

3.9 антитело (antibody): Специфический иммуноглобулин, образованный В-лимфоцитами в ответ на воздействие иммуногенным веществом и способный связываться с ним.

Примечание - Молекула иммуногенного вещества содержит одну или несколько частей с характерным химическим составом, эпитоп.

3.9.1 поликлональное антитело (polyclonal antibody): Смесь антител, способных специфически реагировать с определенным иммуногенным веществом.

3.9.2 моноклональное антитело (monoclonal antibody): Антитело, способное специфически реагировать с одиночным эпитопом определенного иммуногенного вещества.

3.10 зонд нуклеиновой кислоты (nucleic acid probe): Односпиральный олигонуклеотид или полинуклеотид определенной длины, комплементарный со специфической последовательностью нуклеотидов нуклеиновых кислот.

3.11 лектин (lectin): Белок неиммуногенного происхождения с двумя или несколькими связывающими участками, который распознает и связывается со специфическими остатками сахаридов.

4 Требования к информации, предоставляемой изготовителем

4.1 Общие требования

4.1.1 Информация, предоставляемая изготовителем с реагентами, используемыми для окрашивания в биологии

Информация, предоставляемая изготовителем с реагентами, используемыми для окрашивания в биологии, должна соответствовать ИСО 31-8, ИСО 1000, ЕН 375 и ЕН 376. Особое внимание следует уделить предупреждениям, приведенным в ЕН 375. Кроме того, если это применимо, требования, установленные в 4.1.2, 4.1.3 и 4.1.4, должны быть применены к различным реагентам, используемым для окрашивания в биологии.

4.1.2 Наименование продукта

Наименование продукта должно включать в себя регистрационный номер в CAS и наименование и номер индекса красителя, если это применимо.

Примечание1- Регистрационные номера в CAS являются регистрационными номерами в Химической справочной службе (CAS). Они представляют собой числовые кодовые номера веществ, получивших индекс в Химической справочной службе приписанные химическим веществам.

Примечание2 - Индекс красок дает 5-значный номер, номер C.I. и специально составленное наименование большинства красящих веществ.

4.1.3 Описание реагента

Описание реагента должно включать в себя соответствующие физико-химические данные, сопровождаемые сведениями, относящимися к каждой партии. Данные должны содержать, по крайней мере, следующую информацию:

a) молекулярную формулу, включая противоион;

b) молярную массу (г/моль) точно обозначенную, с включением противо-иона или без него;

c) допускаемые пределы интерферирующих веществ;

Для окрашенных органических соединений данные должны содержать:

d) молярную абсорбцию (вместо этого может быть приведено содержание молекулы чистого красящего вещества, но не содержание общего красящего вещества);

e) длина волны или число волн при максимальной абсорбции;

f) данные тонкослойной хроматографии, высокопроизводительной жидкостной хроматографии или высокопроизводительной тонкослойной хроматографии.

4.1.4 Предназначенное применение

Должно быть приведено описание, содержащее руководство по окрашиванию в биологии и количественные и качественные процедуры (если это применимо). Информация должна включать сведения относительно следующего:

a) тип (типы) биологического материала, обращение и обработку перед окрашиванием, например:

1) могут ли быть использованы пробы клеток или тканей;

2) может ли быть использован замороженный или химически-фиксированный материал;

3) протокол для обращения с тканью;

4) какая закрепляющая среда может быть применена;

b) детали соответствующей методики реакции, использованной изготовителем для исследования реактивности красящего вещества, краски, хромогенного реактива, флюорохрома, антитела, зонда нуклеиновой кислоты или лектина, применяемых для окрашивания в биологии;

c) результат (результаты), ожидаемые при методике реакции на предполагаемом типе (типах) материала при способе, намеченном изготовителем;

d) замечания о подходящем положительном или отрицательном контроле ткани и об интерпретации результата (результатов);

4.2 Дополнительные требования к реагентам специфических видов

4.2.1 Флюорохромы

Независимо от типа применения, флюорохромы, предлагаемые для окрашивания в биологии, должны сопровождаться следующей информацией:

а) избирательность, например, описание мишени (мишеней), которые могут быть продемонстрированы, с использованием специфических условий; длины волн света возбуждения и испускания; для флюорохромов, связанных с антителами, отношение флюорохром/белок (Ф/Б).

4.2.2 Соли металлов

В случае, если предлагаются металлсодержащие соединения для применения в поглощающей металл методике при окрашивании в биологии, должна быть приведена следующая дополнительная информация:

систематическое наименование; чистота (отсутствие примесей).

4.2.3 Антитела

Антитела, предлагаемые для окрашивания в биологии, должны сопровождаться следующей информацией:

a) описание антигена (иммуногенного вещества), против которого направлено антитело и если антиген определен кластером системы дифференциации - номер CD. Описание должно содержать, если это приемлемо, тип обнаруживаемой макромолекулы, часть которой должна быть обнаружена, клеточная локализация и клетки или ткани, в которых она находится, и любая перекрестная реактивность с другими эпитопами;

b) для моноклональных антител - клон, метод образования (супернатант культуры ткани или асцитическая жидкость), подкласс иммуноглобулина и идентичность легкой цепи;

c) для поликлональных антител - животное-хозяин, и используется ли цельная сыворотка или фракция иммуноглобулина;

описание формы (раствор или лиофилизированный порошок), количество общего белка и специфическое антитело, а для раствора - природа и концентрация растворителя или среды;

е) если применимо, описание любых молекулярных связующих веществ или наполнителей, добавленных к антителу;

заявление о чистоте, технике очищения и методах обнаружения примесей (например, Вестерн-блоттинг, иммуногистохимия);

4.2.4 Зонды нуклеиновой кислоты

Зонды нуклеиновой кислоты, предлагаемые для окрашивания в биологии, должны сопровождаться следующей информацией:

последовательность оснований и является зонд одно- или двух-спиральным; молярная масса зонда или число оснований и, если приемлемо, число фракций (в процентах) пар оснований гуанин - цитозин;

использованный маркер (радиоактивный изотоп или нерадиоактивная молекула), точка прикрепления к зонду (3" и/или 5") и доля вещества в процентах меченого зонда; обнаруживаемая генная мишень (последовательность ДНК или РНК);

e) описание формы (лиофилизированный порошок или раствор) и количество (пг или пмоль) или концентрация (пг/мл или пмоль/мл), если применимо, и, в случае раствора, - природа и концентрация растворителя или среды;

f) заявление о чистоте, методиках очистки и методах обнаружения примесей, например, высокопроизводительная жидкостная хроматография;

Приложение А (справочное)

Примеры информации, предоставляемой изготовителем с реагентами, обычно применяемыми

в методиках биологического окрашивания

А.1 Общие положения

Следующая информация представляет собой примеры процедур и не должна рассматриваться как единственный способ процедуры, которая должна быть проведена. Эти процедуры могут быть использованы изготовителем для исследования реактивности красящих веществ и иллюстрируют то, каким образом изготовитель может представить информацию, чтобы соответствовать настоящему стандарту.

А.2 Краситель метиловый зеленый-пиронин Y А.2.1 Красящее вещество метиловый зеленый

Информация, касающаяся красящего вещества метиловый зеленый, следующая:

a) идентичность продукта:

Метиловый зеленый (синонимы: двойной зеленый SF, легкий зеленый);

Регистрационный номер CAS: 22383-16-0;

Наименование и номер индекса цвета: основной голубой 20, 42585;

b) состав:

Молекулярная формула, включающая противоион: С 2 бНззМ 3 2 + 2BF4";

Молярная масса с (или без) противоиона: 561,17 г моль" 1 (387,56 г

Массовая доля (содержание) метилового зеленого катиона: 85 %, определено с помощью абсорбционной спектрометрии;

Допустимые пределы интерферирующих веществ, приведенные как массовые доли:

1) вода: менее 1 %;

2) неорганические соли: менее 0,1 %;

3) детергенты: не присутствуют;

4) окрашенные примеси, включая кристаллы виолета: не определимы с помощью тонкослойной хроматографии;

5) индифферентные соединения: 14 % растворимого крахмала;

d) тонкослойная хроматография: присутствует только один основной компонент, соответствующий

метиловому зеленому;

e) обращение и хранение: стабилен при хранении в тщательно закупоренной коричневой бутылке при комнатной температуре (от 18 °С до 28 °С).

А.2.2 Красящее вещество этиловый зеленый

Информация, относящаяся к красящемуся веществу этиловому зеленому, следующая:

a) идентичность продукта:

1) этиловый зеленый (синоним: метиловый зеленый);

2) регистрационный номер CAS: 7114-03-6;

3) наименование и номер индекса красок: наименование в индексе красок отсутствует, 42590;

b) состав:

1) молекулярная формула, включающая противоион: C27H 3 5N 3 2+ 2 BF4";

2) молярная масса с (или без) противоионом: 575,19 г моль" 1 (401,58 г моль" 1);

3) массовая доля этилового зеленого катиона: 85 %, определена с помощью абсорбционной спектрометрии;

Вода: менее 1 %;

Детергенты: отсутствуют;

c) длина волны максимальной абсорбции раствора красящего вещества: 633 нм;

d) тонкослойная хроматография: присутствует только один основной компонент, совпадающий с этиловым зеленым;

А.2.3 Красящее вещество пиронин Y

К красящему веществу пиронин Y относится следующая информация:

а) идентичность продукта:

1) пиронин Y (синонимы: pyronine Y, пиронин G, pyronine G);

2) регистрационный номер CAS: 92-32-0;

3) наименование и номер в индексе красок: наименование в индексе красок отсутствует, 45005;

b) состав:

1) молекулярная формула, включающая противоион: Ci7HigN20 + СГ;

2) молярная масса с (или без) противоионом: 302,75 г моль" 1 (267,30 г моль" 1);

3) массовая доля пиронина Y катиона: 80 %, определена с помощью абсорбционной спектрометрии;

4) допустимые пределы интерферирующих веществ, приведенные как массовые доли:

Вода: менее 1 %;

Неорганические соли: менее 0,1 %;

Детергенты: отсутствуют;

Окрашенные примеси, включая кристаллы виолета: не обнаруживаются с помощью тонкослойной хроматографии;

Индифферентные соединения: 19 % растворимого крахмала;

c) длина волны максимальной абсорбции раствора красящего вещества: 550 нм;

d) тонкослойная хроматография: присутствует только один основной компонент, совпадающий с пиронином Y;

e) обращение и хранение: стабилен при хранении в тщательно закрытой бутылке из коричневого стекла при комнатной температуре от 18 °С до 28 °С.

А.2.4 Предназначенное применение метода окрашивания метиловым зеленым-пиронином Y

А.2.4.1 Тип (типы) материала

Краска метиловый зеленый-пиронин Y применяется для окрашивания свежезамороженных, парафинированных или пластиковых срезов тканей различных видов.

А.2.4.2 Обращение и обработка перед окрашиванием Возможные фиксирующие средства включают в себя:

Жидкость Карноя [этанол (объемная доля 99 %) + хлороформ + уксусная кислота (массовая доля 99 %), смешанные в объемах (60 + 30 + 10) мл] или

Формальдегид (массовая доля 3,6 %), забуференный фосфатом (pH = 7,0); рутинное высушивание, очистка, пропитывание и покрытие парафином, обычное приготовление срезов с помощью микротома.

А.2.4.3 Рабочий раствор

Готовят раствор этилового зеленого или метилового зеленого из количества, соответствующего массе 0,15 г чистого красящего вещества, рассчитанного как окрашенный катион (в приведенных выше примерах 0,176 г в каждом случае) в 90 мл горячей (температура 50 °С) дистиллированной воды.

Растворяют количество, соответствующее массе 0,03 г пиронина Y, рассчитанного как окрашенный катион (в примере, приведенном выше 0,038 г) в 10 мл 0,1 моль/л фталатного буфера (pH = 4,0). Смешивают последний раствор с раствором этилового зеленого или метилового зеленого.

А.2.4.4 Стабильность

Рабочий раствор стабилен по крайней мере одну неделю при хранении в плотно закрытой бутыли из коричневого стекла при комнатной температуре от 18 °С до 28 °С.

А.2.4.5 Методика окрашивания А.2.4.5.1 Депарафинируют срезы.

А.2.4.5.2 Смачивают срезы.

А.2.4.5.3 Окрашивают срезы в течение 5 мин при комнатной температуре около 22 °С в рабочем

растворе.

А.2.4.5.4 Промывают срезы в двух сменах дистиллированной воды, от 2 до 3 с в каждой.

А.2.4.5.5 Стряхивают излишки воды.

А.2.4.5.6 Активируют в трех сменах 1-бутанола.

А.2.4.5.7 Переносят непосредственно из 1-бутанола в гидрофобную синтетическую смолу.

А.2.4.6 Ожидаемый результат (результаты)

Ожидается получение следующих результатов с типами материалов, перечисленными в А.2.4.1:

а) для ядерного хроматина: зеленый (фиксатор Карнов) или голубой (фиксатор формальдегид); а) для нуклеол и цитоплазмы, богатой рибосомами: красный (фиксатор Карнов) или лиловато- красный (фиксатор формальдегид);

c) для матрицы хрящей и гранул тучных клеток: оранжевый;

d) для мышц, коллагена и эритроцитов: не окрашенные.

А.З Реакция Фельгена - Шиффа

А.3.1 Красящее вещество парарозанилин

ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ -Для R 40: возможный риск необратимых эффектов.

Для S 36/37: необходима защитная одежда и перчатки.

Следующая информация относится к красящему веществу парарозанилин.

a) идентичность продукта:

1) парарозанилин (синонимы: основной рубиновый, парафуксин, парамагента, магента 0);

2) регистрационный номер CAS: 569-61-9;

3) наименование и номер индекса красок: основной красный 9, 42500;

b) состав:

1) молекулярная формула, включающая противоион: Ci9Hi 8 N 3 + СГ;

2) молярная масса с (и без) притивоиона: 323,73 г моль" 1 (288,28 г моль" 1);

3) массовая фракция парарозанилина катиона: 85 %, определенная с помощью абсорбционной спектрометрии;

4) допустимые пределы интерферирующих веществ, приведенные как массовые доли:

Вода: менее 1 %;

Неорганические соли: менее 0,1 %;

Детергенты: не присутствуют;

Окрашенные примеси: метилированные гомологи парарозанилина могут присутствовать в следовых количествах, определяемые с помощью тонкослойной хроматографии, но акридин отсутствует;

Индифферентные соединения: 14 % растворимого крахмала;

c) длина волны максимально абсорбции раствора красящего вещества: 542 нм;

d) тонкослойная хроматография: присутствует один основной компонент, соответствующий

парарозанилину; метилированные гомологи парарозанилина в следовых количествах;

e) обращение и хранение: стабилен при хранении в тщательно закупоренной коричневой бутылке при комнатной температуре от 18 °С до 28 °С.

А.3.2 Предназначенное применение реакции Фельгена - Шиффа

А.3.2.1 Тип (типы) материала

Реакция Фельгена - Шиффа применяется для парафинированных или пластиковых срезов различных видов тканей или цитологического материала (мазок, отпечаток ткани, культура клеток, монослой):

А.3.2.2 Обращение и обработка перед окрашиванием

А.3.2.2.1 Возможные фиксирующие вещества

Возможные фиксирующие вещества включают в себя:

a) гистология: формальдегид (массовая доля 3,6 %), забуференный фосфатом, (pH =7,0);

b) цитология:

1) жидкий фиксирующий материал: этанол (объемная доля 96 %);

2) высушенный на воздухе материал:

Формальдегид (массовая доля 3,6 %), забуференный фосфатом;

Метанол+ формальдегид (массовая доля 37 %) +уксусная кислота (массовая доля 100 %), смешанные в объемах (85 +10 + 5) мл.

Материал, фиксированный в фиксаторе Буйна, непригоден для этой реакции.

Детали методики, примененной изготовителем для исследования реактивности хромогенного реагента, приведены в А.3.2.2.2-А.3.2.4.

А.3.2.2.2 Реагент парарозанилин-Шифф

Растворяют 0,5 г парарозанилин-хлорида в 15 мл 1 моль/л соляной кислоты. Добавляют 85 мл водного раствора K 2 S 2 0 5 (массовая доля 0,5 %). Ожидают 24 ч. Взбалтывают 100 мл этого раствора с 0,3 г древесного угля в течение 2 мин и профильтровывают. Хранят бесцветную жидкость при температуре не ниже 5 °С. Раствор стабилен в течение по крайней мере 12 мес в плотно закрытой посуде.

А.3.2.2.3 Раствор для промывания

Растворяют 0,5 г K 2 S 2 O s в 85 мл дистиллированной воды. Добавляют 15 мл 1 моль/л соляной кислоты. Раствор готов к немедленному применению и может быть использован в течение 12 ч.

А.3.2.3 Методика окрашивания

А.3.2.3.1 Депарафинируют парафинированные срезы в ксилене в течение 5 мин, затем промывают в течение 2 мин, сначала в этаноле с объемной долей 99 %, а затем в этаноле с объемной долей 50 %.

А.3.2.3.2 Смачивают пластиковые срезы, депарафинированные парафинированные срезы и цитологический материал в дистиллированной воде в течение 2 мин.

А.3.2.3.3 Гидролизуют материал в 5 моль/л соляной кислоте при температуре 22 °С в течение от 30 до 60 мин (точное время гидролиза зависит от типа материала).

А.3.2.3.4 Промывают дистиллированной водой в течение 2 мин.

А.3.2.3.5 Окрашивают реагентом парарозанилин в течение 1 ч.

А.3.2.3.6 Промывают в трех последовательных сменах промывного раствора по 5 мин в каждой.

А.3.2.3.7 Дважды промывают дистиллированной водой, по 5 мин каждый раз.

А.3.2.3.8 Дегидратируют в этаноле с объемной долей 50 % , затем с 70 % и наконец в 99 % -ном этаноле, по 3 мин каждый раз.

А.3.2.3.9 Дважды промывают в ксилене, по 5 мин каждый раз.

А.3.2.3.10 Извлекают в синтетическую гидрофобную смолу.

А.3.2.4 Ожидаемые результаты

Ожидается получение следующих результатов с типами материалов, перечисленных в А.3.2.1:

Для ядер клеток (ДНК): красный цвет.

А.4 Иммунохимическая демонстрация рецепторов эстрогенов

ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ - Реагент, содержащий азид натрия (15 ммоль/л). NaN 3 может реагировать с свинцом или медью, образуя взрывчатые азиды металлов. При удалении смыть большим объемом воды.

А.4.1 Моноклональный мышиный античеловеческий рецептор эстрогенов

Следующая информация относится к моноклональному мышиному античеловеческому рецептору эстрогенов.

а) идентичность продукта: моноклональный мышиный античеловеческий рецептор эстрогенов, клон 1D5;

b) клон: 1D5;

c) иммуноген: рекомбинантный человеческий белок рецептора эстрогенов;

d) источник антител: моноклональное мышиное антитело, поставленное в жидкой форме как супернатант тканевой культуры;

e) специфичность: антитело реагирует с Л/-концевым доменом (A/В регион) рецептора. При иммуноблоттинге оно реагирует с 67 кДа полипепетидной цепью, полученной путем трансформации Escherichia coli и трансфекции COS клеток плазмидными векторами, экспрессирующими рецептор эстрогенов. Кроме того, антитело реагирует с цитозольными экстрактами лютеального эндометрия и клетками линии MCF-7 рака грудной железы человека;

f) перекрестная реактивность: антитело реагирует с рецепторами эстрогенов крыс;

д) состав: супернатант культуры ткани (среда RPMI 1640, содержащая сыворотку плода теленка), диализированный против 0,05 ммоль/л Tris/HCI, pH = 7,2, содержащий 15 ммоль/л №N3.

Концентрация Ig: 245 мг/л;

Изотип Ig: IgGI;

Идентичность легкой цепи: каппа;

Концентрация общего белка: 14,9 г/л;

h) обращение и хранение: стабилен до трех лет при температуре хранения от 2 °С до 8 °С.

А.4.2 Предназначенное применение

А.4.2.1 Общие положения

Антитело применяется для качественного и полуколичественного обнаружения экспрессии рецептора эстрогенов (например, рак грудной железы).

А.4.2.2 Тип (типы) материала

Антитело может быть применено на парафинированных срезах, фиксированных формалином, замороженных срезах, фиксированных ацетоном, и на мазках клеток. Кроме того, антитело может быть применено для детекции антител фермент-связанным иммуносорбентным исследованием (ELISA).

А.4.2.3 Методика окрашивания для иммуногистохимии

А.4.2.3.1 Общие положения

Для парафинированных срезов тканей, фиксированных формалином, применяют разнообразные чувствительные технологии окрашивания, в том числе иммунопероксидазную методику, технологию АРААР (щелочная фосфатаза антищелочная фосфатаза) и авидин-биотиновые методы, например, методы LSAB (Меченые СтрептАвидин-Биотин). Изменения антигена, такие как нагревание в 10 ммоль/л цитратном буферном растворе, pH =6,0, являются обязательными. Слайды не должны высушиваться при такой обработке или при следующей процедуре иммуногистохимического окрашивания. Для окрашивания мазков клеток предложен метод АРААР.

Детали методики, использованной изготовителем на парафинированных срезах тканей, фиксированных формалином, для исследования реактивности антитела для иммуногистохимии, приведены в А.4.2.3.2 -А.4.2.3.4.

А.4.2.3.2 Реагенты

А.4.2.3.2.1 Перекись водорода, массовая доля 3% в дистиллированной воде.

А.4.2.3.2.2 Трис-буфер солевой (TBS), состоящий из 0,05 моль/л Tris/HCI и 0,15 моль/л NaCI при pH =

А.4.2.3.2.3 Первичное антитело, состоящее из моноклонального мышиного античеловеческого рецептора эстрогенов, разведенного оптимально в TBS (см. А.4.2.3.4).

А.4.2.3.2.4 Биотинилированное козье антитело к мышиным/кроличьим иммуноглобулинам, рабочий

Готовят этот раствор по меньшей мере за 30 мин, но не ранее, чем за 12 ч перед применением, следующим образом:

5 мл TBS, pH = 7,6;

50 мкл биотинилированного, изолированного от аффинитета козьего антитела против мышиных/кроличьих иммуноглобулинов в 0,01 моль/л фосфатном буферном растворе, 15 ммоль/л №N3, в количестве достаточном, чтобы довести конечную концентрацию до 10 - 20 мг/мл.

А.4.2.3.2.5 Комплекс СтрептАвидин-биотин /пероксидаза хрена (StreptABComplex/HRP), рабочий

Готовят данный раствор следующим образом:

5 мл TBS, pH = 7,6;

50 мкл СтрептАвидина (1 мг/л) в 0,01 моль/л фосфатном буферном растворе, 15 ммоль/л NaN 3 ;

50 мкл биотинилированной пероксидазы хрена (0,25 мг/л) в 0,01 моль/л фосфатном буферном растворе, 15 ммоль/л NaN 3 ;

А.4.2.3.2.6 Раствор диаминбензидинового субстрата (DAB)

Растворяют 6 мг 3,3"-диаминбензидинтетрагидрохлорида в 10 мл 0,05 моль/л TBS, pH = 7,6. Добавляют 0,1 мл перекиси водорода массовой долей 3% в дистиллированной воде. Если произошла преципитация, фильтруют.

А.4.2.3.2.7 Гематоксилин

Растворяют 1 г гематоксилина, 50 г алюминий калий сульфата, 0,1 г йодата натрия и 1,0 г лимонной кислоты в 750 мл дистиллированной воды. Доводят до 1000 мл дистиллированной водой.

где коэффициент k характеризует скорость захвата, а показатель степени т - порядок реакции. Величина k изменяется от 0 до оо. При этом при Кг- коэффициент, учитывающий качество основания; Я - высота свободного падения угля, м.

где Р - угол наклона отражающей поверхности, градус; W+5~- содержание класса крупнее 6 мм, %.

И характер воздействий, и внешние механические нагрузки, имеющие место на перепадах транспортного потока, определяются конструктивными параметрами перегрузочных устройств и средств транспорта: высотой перепада, жесткостью и углом наклона отражающей поверхности, скоростью и углом наклона подающего конвейера и другими факторами.

ростью под углом и к горизонту с высоты h на отражающую поверхность, наклоненную в свою очередь под углом Р. В месте соударения отражающей поверхности и антрацита скорость его падения может быть разложена на нормальную vn и касательную vr по отношению к отражающей поверхности составляющие. Кинетическая энергия соударения определяется нормальной составляющей У„, которая может быть определена по формуле

Действующие сегодня классификации рассматривают уголь в основном как энергетическое топливо, поэтому в них недостаточно отражены свойства, важные для процессов химико-технологической переработки. В настоящее время во многих странах ведутся исследования по разработке методов однозначной оценки пригодности любого угля для различных направлений его технологического использования, в.том числе и для переработки в моторные топлива. В Советском Союзе в последние годы завершена разработка такой единой классифика-: дни углей на основе их генетических и технологических параметров. По этой классификации петрографический состав угля выражается содержанием фю-зинизированных микрокомпонентов. Стадия метаморфизма определяется по показателю отражения витринита, а степень восстановленности выражается комплексным показателем: для бурых углей - по выходу смолы полукоксования, а для каменных углей - по выходу летучих веществ и спекае-мости. Каждый из классификационных параметров отражает те или иные особенности вещественного состава и молекулярной структуры углей.

До 1989 г. по каждому угольному бассейну имелась своя классификация, закрепленная соответствующим ГОСТом. Основами этих классификаций для разделения углей на марки и внутри каждой марки на группы были: выход летучих веществ, толщина пластического слоя и характеристика нелетучего остатка при определении выхода летучих веществ. С 1991 года введена Единая классификация каменных углей. По стандарту, который предусматривает новые классификационные параметры, угли делятся по видам, в зависимости от величины показателя отражения витринита, теплоты сгорания и выхода летучих веществ на бурые, каменные и антрациты.

кевич и Ю.А.Золотухин пытались разработать методику прогноза прочности кокса с учетом петрографического состава и показателя отражения витринита. Принималась во внимание неоднородность углей в шихтах по степени метаморфизма и микролитотипному составу. Учитывался также показатель толшины пластического слоя, а также зольность прогнозируемой шихты, вычисляемая по аддитивности.

Как видно, в пределах каждой пары дифференцированных по батареям шихт нет заметных различий по зольности, содержанию общей серы, спе-каемости. Выход летучих веществ несколько ниже у шихт, предназначенных для коксовой батареи № 1-бис. Величины комплексных показателей для всех вариантов соответствуют или близки оптимальным срединным значениям, некоторое предпочтение при этом можно все же отдать шихтам для батареи № 1-бис. В табл. 6 приведены подтверждающие это положение характеристики спе-каемости. Петрографические характеристики опытных шихт, включающие средние величины показателя отражения витринита и распределение различных стадий метаморфизма в пределах вит-ринитовой составляющей угольных шихт, представлены в табл. 7.

Варианты шихт Показатель отражения витринита р О/ "0, /О Стадия метаморфизма витринита, %

петрографический;

Стадия метаморфизма устанавливается по отражательной способности витринита. Сущность метода заключается в измерении и сопоставлении электрических токов, возникающих в фотоэлектронном умножителе при отраженном свете от полированных поверхностей образца и образца сравнения. Показатель отражения витринита для каменных углей находится в пределах от 0,40 до 2,59 .

Углями низкого ранга считаются угли с высшей теплотой сгорания менее 24 МДж/кг и средним показателем отражения витринита /?„ менее 0,6 %;

Углями более высокого ранга считаются угли с высшей теплотой сгорания равной или более 24 МДж/кг, а также с высшей теплотой сгорания менее 24 МДж/кг при условии, что средний показатель отражения витринита равен или превышает 0,б %.

Средний показатель отражения витринита, К,„% -две цифры

Первые две цифры кода обозначают отражательную способность вмтри-нита, соответствующую нижнему пределу 0, 1%-ного диапазона значений среднего показателя отражения витринита, умноженному на 10;

Измерение отражательной способности витринита Ro% относится к наиболее распространённым методом оценки степени созревания ОВ в осадках. Отражательная способность витринита измеряется как отношение интенсивностей отражённого и падающего пучков света. Согласно физическим законам отражения и преломления света,

Доля интенсивности, Rо, луча монохроматического света, который нормально отражается от плоской поверхности куска витринита с показателем преломления n, погружённого в масло с показателем преломления, n o (или в воздух с показателем n а), равна:

Показатели преломления n и n o , определяются интегральной температурной историей образца витринита, т.е. функцией T(t). Основу метода составляет представление о том, что в процессе углефикации витринит меняет свою отражательную способность от значений Ro = 0.25% на стадии торфа до Ro=4.0% на стадии антрацита (Лопатин, Емец, 1987). Огромный фактический материал, накопленный к настоящему времени, дает возможность идентифицировать те или иные стадии созревания по измеренным значениям Ro%. При этом возможны вариации в значенияx Ro% для ОВ разного типа, а также в зависимости от содержания примесей в ОВ. Так, Ro = 0.50 % приблизительно соответствует началу главной стадии образования нефти для высокосернистыx керогенов, тогда как Ro = 0.55 - 0.60% - той же стадии для керогенов типа I и II (см. ниже), а Ro = 0.65 - 0.70% - для керогенов типа III (Gibbons et al., 1983; Waples 1985). Один из вариантов предполагаемого соответствия значений Ro% основным стадиям созревания ОВ и вычисляемым значениям температурно-временного индекса (ТВИ), обсуждаемого ниже, можно увидеть в табл.1-7а , а также на рис. 1-7 . Соответствие стадий катагенеза значениям Ro, приведенное в таблице, основано на корреляционной связи вычисленных Температурно-Временных Индексов (ТВИ) и значений Ro%, измеренных в разных бассейнах мира, и является приближённым. Тем не менее, оно широко используется в литературе и обсуждается подробнее в разделе 7-5-1. Для удобства ориентации в различных шкалах катагенеза ОВ в табл.1-7б приводится также шкала соответствия значений

Табл.1-7а. Соответствие значений Ro% и ТВИ стадиям катагенеза ОВ (Waples,1985)

отражательной способности витринита %Ro стадиям зрелости ОВ, принятым в российской нефтяной геологии.

Табл.1-7б. Соответствие значений Ro% стадиям катагенеза ОВ, принятым в российской нефтяной геологии (Парпарова и др., 1981)

Диагенез: ДГ3, ДГ2 и ДГ1 ------ Ro < 0.25%

Протокатагенез: ПК1 (0.25 £ Ro £ 0.30%)

ПК2 ((0. 30 £ Ro £ 0.42%)

ПК2 ((0.42 £ Ro £ 0.53%)

Мезокатагенез: МК1 (0.53 £ Ro £ 0.65%)

МК2 ((0. 65 £ Ro £ 0.85%)

МК3 ((0.85 £ Ro £ 1.15%)

МК4 ((1. 15 £ Ro £ 1.55%)

МК5 ((1.55 £ Ro £ 2.05%)

Апокатагенез: АК1 (2.05 £ Ro £ 2.50%)

АК2 ((2. 50 £ Ro £ 3.50%)

АК3 ((3.50 £ Ro £ 5.00%)

АК4 ((Ro > 5.00%)

Коротко скажем о некоторых проблемах, связанных с использованием измерений %Ro для оценки степени катагенеза ОВ. Они связаны прежде всего со сложностью выделения витринитовыx мацералов из ОВ осадочныx пород из-за иx большого разнообразия. Использование отражательной способности витринита для контроля палеотемпературных условий возможно, вообще говоря, лишь на основе витринита из угольных пластов и с меньшей надёжностью витринита из континентального (“terrestrial”) материнского ОВ в глинах с содержанием органического углерода, не превосходящим 0.5% . Но и в этих континентальных (terrestrial) сериях следует соблюдать осторожность, так как в таких породах как песчаники основная часть ОВ может быть переработана и изменена (Durand et al.1986). Необходимо учитывать также и тот факт, что в любом случае для Ro > 2% отражательная способность будет зависеть ещё и от давления. Следует соблюдать осторожность и в распространении концепции витринита на морские и озёрные серии пород, так как в таких породах частицы, отражательная способность которых измеряется, редко являются витринитами высших растений и в большинстве случаев

Рис. 1-7. Корреляция отражательной способности витринита, Ro%, и степени углефикации с другими индексами зрелости и с положением зон генерации и разложения нефти и газа Вверху: по (Kalkreuth and Mc Mechan, 1984), внизу по (Tissot et al., 1987).

являются битуминоидами от планктона, ошибочно принимаемые за витринит (Waples, 1985; Durand et al. 1986). По термофизическим свойствам они отличаются от витринита. Аналогичная проблема существует и для континентальных (terrestrial) пород кембрий-ордовика и более древних возрастов. Они не могут содержать витринита, так как высших растений тогда не существовало. Во всех красноцветных формациях ОВ окислено. В известняках витриниты сохраняются реже и, если они присутствуют там, то их отражательная способность может отличаться от значений для нормального витринита той же степени углефикации (Buntebarth and Stegena, 1986).

Определённые ошибки в этом методе оценки катагенеза ОВ будут возникать и вследствие значительных разбросов в измеряемыx значенияx Ro, а также из за того факта, что в разрезе бассейна всегда будут присутствовать горизонты, в которых выделение витринита затруднено или невозможно вовсе. Например, при низких уровнях зрелости выделение витринитовых мацералов представляет большую проблему, и в связи с этим надёжность измерений Ro для значений меньших 0.3 - 0.4% крайне низка (Waples et al. 1992). Зависимость отражательной способности витринита от исходного химического состава витринита будет существенной (Durand et al.1986). Это объясняет тот факт, что большой разброс в значениях Ro% часто наблюдается даже в пределах одного бассейна (Tissot et al.1987). Чтобы сделать ошибку от вариаций в химическом составе витринита минимальной измерения Ro% проводят на образцах правильного витринита, выделенного стандартной процедурой из органической материи континентального происхождения. Не рекомендуется использовать эквивалентные виды витринита в ОВ типов I и II при создании универсальных шкал соответствия значений Ro% степеням преобразования ОВ (Tissot et al. 1987).

И всё же, при разумном учете сделанных замечаний метод оценки уровня зрелости ОВ и контроля через него палеотемпературных условий погружения осадочной толщи по измерениям отражательной способности витринита относится в настоящее время к наиболее надежным и распространённым методам в практике анализа нефетгазоносных бассейнов.

7.3 Использование измерений %Ro и других методов для оценки максимальных температур пород в истории погружения бассейна

Первоначально измерения отражательной способности витринита использовались для оценки максимальных температур T max в истории погружения свит. Для подобных целей в геологических исследованиях применялись и применяются целый ряд методов, таких как (Yalcin et al., 1997): 1) оценки T max по уровню зрелости ОВ (степени углефикации, отражательной способности витринита; 2) оценки, основанные на минералогических изменениях при диагенезе глинистых минералов и кристаллизации иллита; 3) методы, основанные на анализе жидкостных включений, например, температуры гомонизации жидкости; 4) геотермометры, основанные на специфических химических реакциях, например, характеризующих равновесие устойчивых изотопов (Hoefs, 1987) или равновесные состояния системы SiO 2 -Na-K-Ca (Ellis and Mahon, 1977); 5) Физзион-трэк анализ (анализ распределения следов от деления радиоактивных элементов в аппатите; Green et al., 1989; 1995); 6) на основе комбинации определений радиометрического возраста таких радиометрических систем, как K-Ar, Rb-Sr и U, которые замыкаются при различных температурах (Buntebarch and Stegena, 1986). Так как оценки палеотемператур до сих пор широко распространены в геологической литературе, мы коротко охарактеризуем каждый из этих методов. Начнём изложение с оценок максимальных температур пород по значениям отражательной способности витринита.

Отметим сразу, что развитие методов оценки максимальных температур в истории погружения осадочных свит (T max) связано с тем, что в 70-ые и 80-ые годы прошлого века многие исследователи рассматривали температуру как основной и по сути единственный фактор эволюции зрелости ОВ осадков. Влиянием времени на процесс созревания ОВ при этом пренебрегалось. Считалось, что измеренные (или вычисленные) значения отражательной способности витринита %Rо должны отражать максимальные температуры пород в истории их погружения. Следуя таким взглядам, предлагались различные корреляционные соотношения между значениями T max и отражательной способностью витринита породы в воздухе %R а и в масле %Ro . Например, в работах Аммосова и др. (1980) и Курчикова (1992) предлагается оценивать значения T max по измеренным величинам %R а из соотношения

10×R а (%) = 67.2× (7-1)

Для образцов углистых прослоек в породах, из соотношения

10×R а (%) = 67.2× (7-2)

Для песчаников и алевролитов и по уравнению

10×R а (%) = 67.2× (7-3)

Для глин и аргиллитов. В приведённых выражениях T max выражена в °С. Прайс (Price, 1983) также полагал, что время в один и даже более млн. лет не оказывает заметного влияния на процесс созревания ОВ и на основании этого предложил соотношение, подобное (7-1) – (7-3), связывающее T max с отражательной способностью витринита в масле (%Ro):

T max (°С) = 302.97×log 10 Ro(%) + 187.33 (7-4)

Несколько подобных соотношений было рассмотрено К. Баркером (Barker and Pawlevicz, 1986; Barker, 1988, 1993). Первое из них (Barker and Pawlevicz, 1986):

ln Ro(%) = 0.0078×T max (°С) - 1.2 (5)

опиралось на 600 измерений T max в 35 скважинах различных бассейнов мира. По мнению авторов, оно справедливо в интервале температур 25 £ T max £ 325°C и отражательных способностей витринита 0.2% £ Ro £ 4.0%. К. Баркер (Barker, 1988) предложил соотношение, описывающее ситуации с постоянной скоростью нагревания пород при погружении в бассейне:

T max (°С) = 104×ln Ro(%) + 148. (7-6),

и основанное на кинетической модели созревания витринита (Burnham and Sweeney, 1989). М. Джонсон и др. (Johnsson et al., 1993), анализируя эту формулу, замечают, что она неплохо описывает ситуацию со скоростями нагревания V = 0.1 – 1 °C/млн. лет, но для скоростей V = 10 – 100 °C/млн. лет недооценивает значения T max в области Ro < 0.5% и переоценивает их при Ro > 2%. В своей более поздней работе Баркер (Barker, 1993) предложил ещё один вариант корреляционной связи T max с %Ro, не содержащий ограничения на скорости нагревания пород,:

T max (°С) = [ ln(Ro(%) / 0.356) ] / 0.00753 (7-7)

Таким образом, в литературе предлагается достаточно много корреляционных соотношений T max - %Ro. На рис. 2-7 они сопоставлены друг с другом по результатам оценок T max для значений 0.4% £ Ro £ 4.0%.

Рис. 2-7. Соотношения, связывающие максимальную температуру T max в истории погружения породы с измеренными значениями отражательной способности витринита в масле %Ro, по различным литературным источникам: 1 (для углей), 2 (для песчаников и алевролитов), 3 (для глин и аргиллитов) – (Аммосов и др., 1980; Курчиков, 1992); 4 - (Price, 1983); 5 - (Barker and Pawlevicz, 1986); 6 - (Barker and Pawlevicz, 1986); 7 - (Barker, 1993); 8 - по температуре гомогенизации жидких включений (Tobin and Claxton, 2000).

Из этого рисунка очевиден значительный разброс в значениях T max , отвечающих фиксированным значениям Ro, который достигает 60 - 100°С для зрелости Ro ³ 0.7%. Этот разброс однозначно свидетельствует о том, что значение температуры (пусть даже и максимальное) одно не может определять зрелость ОВ в породах, и что время выдержки температуры играет заметную роль в созревании ОВ. Не исключено, что в отдельных интервалах Ro и в особых условиях осадконакопления (типа тех, что обеспечивают неизменную скорость прогревания пород) некоторые из приведённых соотношений неплохо описывают ситуацию, но как показывают исследования (см. ниже), одни и те же значения %Ro могут быть достигнуты, например, при более низких температурах но с большим временем выдержки породы (см. ниже). По этой причине всегда находится бассейн и формация с соответствующим интервалом зрелости и температур, для которых оценки по соотношениям (7-1) – (7-7) будут приводить к заметным ошибкам. Это обстоятельство имело следствием то, что популярность выписанных соотношений заметно снизилась за последние 10-15 лет.

Другим распространённым методом оценки палеотемператур пород в бассейнах является определение T max по анализу состава жидкостей, захваченных в процессе диагенеза матрицей пород. Применение метода возможно при выполнении следующих условий (Burruss 1989): 1) включение является однофазной жидкостью, 2) объём этой жидкоcти не меняется после её захвата породой, 3) состав её также оставался неизменным, 4) влияние давления на состав жидкости заранее известно, 5) время и механизм улавливания жидкости также известны. Перечисленные условия говорят о том, что необходима известная осторожность в применении метода (Burruss 1989). Во-первых, необходимы детальные петрографические исследования, чтобы установить относительное время формирования жидкого включения. Во-вторых, необходим тщательный анализ тектонического развития района и истории погружения бассейна для детализации истории вмещающих пород. Необходим также анализ фазового поведения и химического состава захваченной жидкости. Но и после этого остаются две важных проблемы - одна, связанная с предположением о неизменности химического состава жидкости после её захвата матрицей породы (имеются убедительные свидетельства, что это не всегда так), и другая, связанная с определением величины и типа давления, существовавшего в период вмещения жидкости - было ли оно литостатическим или гидростатическим (Burruss 1989). В случае, если все указанные проблемы решены, температура породы на момент захвата жидкости определяется по соответствующей Р-Т диаграмме равновесия жидкой и твёрдой фаз исследуемого вещества. В развитие этого метода Тобин и Клакстон (Tobin and Claxton, 2000) предложили использовать корреляционную связь температуры гомогенизации жидких включений T hom и отражательной способности витринита Ro% (Рис. 2-7):

Ro% = 1.9532 ´ log T hom – 2.9428 (7-8)

Они установили, что при использовании «идеального» ряда измерений соотношение (7-8) выполняется с коэффициентом корреляции 0.973 и дисперсией данных менее 0.12% Ro. Если же используется весь ряд мировых данных то соотношение вида:

Ro = 2.1113 ´ log T hom – 3.2640 (7-9)

будет выполняться c коэффициентом корреляции 0.81 и максимальной дисперсией данных менее 0.32% Ro (Tobin and Claxton, 2000). Температуру гомогенизации T hom часто используют как оценку максимальной температуры пород T max в процессе её погружения в бассейне. Однако, рис. 2-7 показывает, что кривая, построенная по формуле (7-9), заметно отличается от оценок T max по формулам (7-1) – (7-7), пересекая остальные линии на рис. 2-7. Она явно занижает температуры для Ro < 1.5% и даёт нереально высокие значения при Ro > 2% (Th = 540, 930 и 1600°C для Ro=2.5, 3 и 3.5%, соответственно).

Рис.3-7 Изменение изотопного отношения d 13 C с глубиной для газового месторождения бассейна Анадарко (США; Price, 1995).

В ряде работ (Rooney et al., 1995; Price, 1995 и др.) для оценки температуры генерации углеводородов предлагается использовать изменение изотопного состава углерода в ходе катагенеза ОВ (рис. 3-7) . Результаты экспериментов по генерации газов ОВ типа II (материнские породы бассейнов Делавар и Вал-Верде в западном Техасе) при постоянной скорости нагревания пород 1°С/мин (левый рис. 4-7 ; Rooney et al., 1995) демонстрируют заметное изменение изотопного состава газов

Рис. 4-7. Температура генерации газа и изотопное отношение d 13 C для метана (d 13 C 1), этана (d 13 C 2) и пропана (d 13 C 3), генерированных керогеном типа II материнских пород бассейнов Делавар и Вал-Верде в западном Техасе при скорости нагревания пород 1°С/мин (левый рис., по Rooney et al., 1995) и Изотопное отношение d 13 C для метана, генерированного при различных температурах в ходе гидроидного пиролиза образцов пород с ОВ различного типа (правый рис., по Price, 1995).

с температурой и тем самым подтверждают принципиальную возможность использования этой зависимости для оценки температуры генерации газов ОВ данного типа. О том же говорят и результаты гидроидного пиролиза образцов пород с ОВ различного типа, приведённые на левом рис. 4-7. Они также наглядно демонстрируют изменение изотопного отношения d 13 C для метана, генерированного при разных температурах (Price, 1995). Однако, эти эксперименты указывают и на крайне высокую чувствительность изменений d 13 C к вариациям в составе и типе ОВ, в силу чего применение метода возможно лишь после детального анализа состава ОВ и получения соответствующих зависимостей именно для анализируемого типа вещества. Широкий разброс в значениях d 13 C с глубиной, показанный на рис. 3-7 для типичного разреза осадочного бассейна, в основном и вызван вариациями в составе и типе ОВ в породах макро и микро слоёв разреза. Такой разброс сильно ограничивает достоверность оценок температур по изотопным отношениям в газах реальных осадочных разрезов.

Процесс преобразования смектита в иллит в глинистых минералах также иногда используется для контроля палеотемпературных условий в бассейнах. Однако, рис. 5-7 показывает, что интервалы температур, характерные для процесса, довольно широки. Такой разброс по температурам не удивителен, так как лабораторные исследования показывают, что процесс преобразования смектита в иллит управляется кинетической реакцией 6-ого порядка (Pytte and Reynolds, 1989) и, следовательно, время влияет на скорости этих переходов наряду с температурой. Подробнее эти реакции будут рассмотрены в заключительном разделе этой главы, здесь же отметим, что разумные оценки температуры перехода смектита в иллит возможны лишь для изотермического варианта преобразования минералов, но и тогда погрешность метода будет заметной.

Рис.5-7 Преобразование глинистых минералов по данным анализа образцов из 10 скважин Северного моря (Dypvik, 1983). Процессы исчезновения смектита и слоёв иллита разных уровней в смешаннослойных смектит-иллитовых глинистых минералах привязаны к значениям температур и отражательной способности витринита.

Из всех микрокомпонентов ОВ самым лучшим с точки зрения показательности при изучении степени катагенетического преобразования является витринит. Дело в том что, для надежной диагностики необходим микрокомпонент, который должен иметь закономерное изменение свойств в процессе преобразования, в то же время он должен быть широко распространен в ОВ. Витринит отвечает всем вышеуказанным требованиям, в отличие от остальных микрокомпонентов углей и РОВ. Которые либо сливаются с общей органической массой углей уже на средних стадиях катагенеза (лейптинит), либо слабо и неравномерно реагирующими на изменение параметров окружающей среды(фюзинит). И только витринит меняет свои свойства закономерно постепенно и очень легок в диагностике.

Именно на основании отражательной способности витринита построено большинство шкал для определения степени катагенеза. Кроме него используются и другие микрокомпоненты РОВ, но в меньшей степени. В основе метода лежит закономерность повышения блеска в процессе катагенеза. Это легко можно увидеть визуально, если рассмотреть изменение блеска углей в процессе их изменение. Не требуется особых приборов, чтобы заметить, что блеск антрацита, например, намного выше блеска, бурого угля. Отражательная способность тесно связана с внутренним строением вещества, а именно со степенью упаковки частиц в веществе. От этого как раз она и зависит. Конечно, изучение степени катагенеза по отражательной способности проводится с использованием специального оборудования, например, установка ПООС-I прибор состоит из поляризационного микроскопа, оптической насадки, фотоэлектронного умножителя (ФЭУ) и регистрирующего устройства. При проведении исследования сравниваются фототоки, вызванные светом, отраженным от поверхности образца и эталона.

Итак, за эталон при проведении исследований принят витринит, точнее его отражательная способность. Она измеряется при помощи различных фотометров и эталонов в воздухе и иммерсионной среде при строго перпендикулярном падении света на хорошо отполированную поверхность образца. Измерения проводятся лишь в узком диапазоне длин волн: от 525 до 552 нм. Это ограничение связано с техническими характеристиками прибора. За эталон принята длинна волны 546,1 нм, но небольшие колебание вокруг этого значения, практически не оказывает заметного влияния на значение измерения. Образец закрепляется на столике микроскопа и останавливается так, чтобы его поверхность была перпендикулярна оси оптической насадки. Как было сказано выше, мы измеряем интенсивность отраженного света поочередно у образца и эталона при помощи ФЭУ. По определению, отражательная способность - способность отражать часть света падающего на поверхность. Если перевести это на числовой язык, то это отношение отраженного света к падающему.

Что можно записать, как:

Где I1 - это интенсивность отраженного света, а I2 - это интенсивность падающего света. Практически же при проведении измерений используется формула

Здесь R - искомый показатель отражения, d - показания прибора при измерении исследуемого вещества, а R1, соответственно, - показатель отражения эталона и d1- показания прибора при измерении эталона. Если настроить прибор-приемник на нулевое значение для эталона, тогда формула упрощается до R=d.

Кроме витринита, для проведения измерений используются и другие микрокомпоненты ОВ. Некоторые из них обладают свойством анизотропии отражательной способности. Обычно применяется три параметра измерения: Rmax Rmin Rcp. Повышение анизотропии витринита в процессе катагенеза связано в основном с процессом постепенного упорядочивания ароматических гуминовых мицелл, связанного с повышением давления с увеличением глубины погружения. Измерения в случае анизотропного препарата идейно ничем не отличаются от измерения однородного образца, но проводится несколько измерений. При этом столик микроскопа вращается на 360? с промежутками по90?. Всегда детектируется два положения с максимальным показателем отражательной способности и два с минимальной. Угол между каждыми из них составляет 180?. Измерения проводятся для нескольких фрагментов породы, и позже вычисляется среднее значение. Как среднее арифметическое средних значений максимального и минимального измерения:

Можно сразу определять среднее значение, выбирая угол поворота 45? от максимального или минимального значения, но это измерение верно только при изучении слабо преобразованного ОВ.

При проведении исследований, возникает несколько проблем, связанных с технологией. Например, если мы имеем породу, с низким общим содержанием ОВ то появляется необходимость специальной обработки образца и перевода его в форму концентрированных аншлифов-брикетов. Но в процессе получения концентратов исходное органическое вещество подвергается химической обработке, что не может не сказаться на оптических свойствах вещества. Кроме того теряется информация о структуре органического вещества породы. Искажения в измерениях может внести и то, что технология процесса приготовления препарата не стандартизировано и готовность образца обычно определяется визуально. Проблему представляет так же физические свойства пород, такие например как сильная минерализация или хрупкость угля, в этом случае приходится изучать отражательную способность на той площади поверхности, которую удалось получить. Если правильно выбрать участок, то окружающие дефекты практически не влияют на измерения. Но принципиально количественные величины ошибок, практически не влияют на определение стадии катагенеза.

Образцы изучаются, обычно в условиях обычной воздушной среды, это легко, быстро. Но если необходимо детальное изучение под большим увеличением, применяют иммерсионные среды, обычно это кедровое масло. Оба измерения верны и каждый из них используется, но каждый в своем определенном случае. Преимущества измерений в иммерсионной среде заключаются в том, что они позволяют изучать частицы с малой размерностью, кроме того, повышается резкость, что позволяет более детально диагностировать степень катагенеза.

Дополнительной трудностью при исследованиях является диагностика микрокомпонентов ОВ так как они обычно определяются в проходящем свете. В то время как отражательная способность, очевидно в отраженном. Поэтому. Обычно в процессе исследований комбинируют два метода. То есть попеременно используют проходящий и отраженный свет для изучения одного и того же фрагмента РОВ. Для этого обычно используются двусторонне полированные шлифы. В них после просмотра и определения микрокомпонента в проходящем свете освещение переключается и проводятся замеры в отраженном свете.

Витринит может использоваться не только для определения степени преобразованности органического вещества, но и для определения его отношения к породе. У сингенетичного витринита форма фрагментов обычно удлиненная, расположены частицы параллельно плоскостям напластования и, обычно обладают клеточной структурой. Если же мы имеем дело с частицами витринита округлой, окатанной формы, то скорее всего это переотложенное вещество.